蛋白质印迹法（免疫印迹试验）Western Blot

Western Blot，又称为蛋白质印迹或免疫印迹技术，是一种经典的生物化学分析手段。该技术流程始于将细胞或组织样本中的蛋白质混合物通过SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离，依据分子量大小将其分离开来。随后，这些分离的蛋白质条带被转移到一种固相支持介质，通常是硝酸纤维素膜（NC膜）或PVDF膜上。这一转移步骤保留了凝胶上蛋白质的分离模式，形成了所谓的“印迹”。

接下来的关键步骤涉及使用特异性抗体来探测目标蛋白质。首先，膜会被封锁以减少非特异性结合，然后与目标蛋白特异性结合的一抗孵育。一抗与目标蛋白结合后，会加入带有标记的二抗，该二抗能识别一抗并携带可视化标签，如酶或荧光分子。通过对膜的显色处理，标记的二抗会产生清晰可辨的信号，指示出目标蛋白在膜上的位置及其相对量。

通过观察并分析膜上形成的特定色彩斑点或条带的位置及其强度（着色深度），研究人员可以获取关于目标蛋白质在原始样本中的存在状态、分子量以及相对表达水平的信息。因此，Western Blot技术成为了研究蛋白质表达变化、验证基因功能、以及在多种生物学研究领域中进行蛋白质分析的强有力工具。