circRNAs(Circular RNAs，环状RNA)解决方案

环状RNA（Circular RNAs，简称circRNAs）代表了一类独特的非编码RNA分子，其特征在于不具有典型的5'端帽结构和3'端poly(A)尾巴，而是通过特殊的共价键连接形成闭环结构。circRNA源自前体mRNA的可变剪接过程，广泛分布于各类生物体的细胞之中。它们展现出高度的结构稳定性、丰富的表达水平、跨物种的保守性，以及表达特异性的时空分布等特点。

近年来，科学研究揭示了circRNA在基因表达调控中的潜在重要角色。它们可以扮演“分子海绵”的角色，通过吸附微小RNA（miRNA），有效阻止miRNA与其靶mRNA的结合及后续的抑制作用；此外，circRNA还能够直接与其他RNA分子通过碱基配对相互作用，影响RNA的水平与功能。更有甚者，circRNA能与特定蛋白质相互作用，调节蛋白质的活性与功能。由于circRNA的环状结构赋予了其对核酸酶的高度抵抗性，这让它们相比线性RNA更加稳定，为开发新型疾病诊断标志物和治疗策略提供了独特的优势。

尽管circRNA的发现为生物医学研究开辟了新视野，这一领域的探索仍处于初级阶段。circRNA确切的生物学功能、调控机制及其在复杂生理病理过程中的作用仍有待进一步的深入探索，标志着这是一个充满挑战与机遇的研究前沿。

circRNA研究方案

技术流程

 1、  筛选cirRNA（寻找差异表达的circRNA）：RNA-seq、芯片、生物信息学分析；

2、  circRNA鉴定及定位：RT-PCR、Sanger测序、Northern blot分析、RNA-Fish；

3、  circRNA 表达分析：细胞水平、组织水平、临床样本验证；

4、  circRNA体外功能验证：circRNA过表达或干扰、细胞转染、细胞划痕实验、transwell迁移和侵袭实验等；

5、  circRNA体内功能验证：circRNA过表达或干扰、或构建异种移植模型、免疫组织化学、RT-QPCR、WB等；

6、机制研究：序列预测比对、设计microRNA探针和circRNA探针、 RNA pulldown、RT-QPCR、 双荧光素酶报告系统确定结合位点。